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更新日期2025-01-22 10:34
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多肽合成儀的工作原理基于固相肽合成(Solid Phase Peptide Synthesis, SPPS)技術(shù)。它通過將肽鏈的合成反應(yīng)固定在固體載體(通常是樹脂)上,使得每一個氨基酸分子能夠逐步連接成一個完整的肽鏈。以下是多肽合成儀的工作原理簡要概述:
1.固相合成(SPPS)
固相肽合成是將氨基酸逐步加入到固體支持物上的過程。每個氨基酸通過肽鍵與前一個氨基酸連接。合成過程分為以下幾個主要步驟:
(1)樹脂載體的準(zhǔn)備:
首先,合成儀中需要使用含有氨基末端的固相載體(樹脂)。這些樹脂通常是PS或其他合適的化學(xué)聚合物,表面上攜帶一個可反應(yīng)的基團(tuán)(如氨基基團(tuán))。這些樹脂為肽鏈的生長提供了一個穩(wěn)定的支持。
(2)氨基酸的逐步加入:
每一輪合成過程涉及以下步驟:
①去保護(hù):氨基酸在合成前常常帶有保護(hù)基團(tuán),避免其不必要的反應(yīng)。合成儀會使用化學(xué)方法去除保護(hù)基團(tuán),使其能與下一個氨基酸反應(yīng)。
②氨基酸接入:去保護(hù)后的氨基酸通過化學(xué)反應(yīng)(通常是與活化試劑反應(yīng))與樹脂上的氨基反應(yīng),形成肽鍵。
③洗滌和清洗:在每一步之后,合成儀會用溶劑清洗反應(yīng)區(qū)域,以去除未反應(yīng)的試劑和副產(chǎn)物。
(3)重復(fù)過程:
每個氨基酸通過這樣的方式逐步加入肽鏈。每次加入新氨基酸前,合成儀會先清除保護(hù)基團(tuán),然后激活新氨基酸,并使其與樹脂上的殘留基團(tuán)發(fā)生反應(yīng)。這樣重復(fù)進(jìn)行,直到整個肽鏈合成完成。
2.去保護(hù)和切割:
合成完成后,肽鏈仍然被固定在樹脂上。為了從樹脂上脫離肽鏈,合成儀將使用酸性溶液(如三氟氯化硼或其他試劑)去除樹脂上的結(jié)合基團(tuán),并將肽從樹脂上切割下來。此時,合成的肽已經(jīng)形成,但還需要進(jìn)行純化。
3.純化與分析:
一旦肽鏈合成完成并切割下來,通常需要通過高效液相色譜(HPLC)等技術(shù)進(jìn)行純化,以去除未反應(yīng)的殘余氨基酸或肽鏈段。然后,通過質(zhì)譜分析等方法對最終的肽產(chǎn)物進(jìn)行確認(rèn),以確保其質(zhì)量和正確的氨基酸序列。
4.多通道工作原理:
現(xiàn)代的多通道多肽合成儀能夠同時進(jìn)行多個合成反應(yīng)。每個通道有自己的反應(yīng)區(qū)和獨立控制系統(tǒng),能夠同步進(jìn)行多肽合成。這樣,研究人員能夠在同一批次中合成不同序列的多肽,從而提高工作效率。
總結(jié)
多肽合成儀的工作原理通過固相肽合成技術(shù),在樹脂載體上逐步合成多肽。每一輪合成過程涉及氨基酸的去保護(hù)、接入、清洗等步驟,最后通過酸性溶液切割肽鏈并進(jìn)行純化。多通道設(shè)計使得同一時間可以并行合成多個肽,顯著提高了合成效率。
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